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全自动滤料过滤性能测试仪

凝胶过滤(gel filtration,GF)测试实验浅析

    凝胶的选择 按照层析物质分子量的巨细选择差异型号的凝胶,如除盐和除游离的荧光素,则可选用粗、中粒度的G25或G50,G250多用于疏散卵白质单体,G200多用于疏散卵白质凝胶聚合体......

    一、凝胶的选择
  按照层析物质分子量的巨细选择差异型号的凝胶,如除盐和除游离的荧光素,则可选用粗、中粒度的G25或G50,G250多用于疏散卵白质单体,G200多用于疏散卵白质凝胶聚合体等。
  二、凝胶的预处理赏罚
  称取适量的凝胶插手过量的缓冲液在冰箱(或室温)中充实膨胀,或在滚水中煮,膨胀时刻应按照差异型号的凝胶而定。
  凝胶量与型号和层析柱巨细与规格及凝胶用量
  层析柱规格 凝胶的规格和用量(g)
  直径(cm) 高(cm) 容量(ml) G25 G50 G100 G200
  0.9 15 9.5 2.5 1 0.6 0.3
  0.9 30 19 5 2 1.2 0.6
  0.9 60 38 10 4 2.5 1.2
  1.6 20 40 10 4 2.5 1.2
  1.6 40 80 20 8 5.0 2.4
  1.6 70 140 35 14 9.0 4.4
  1.6 100 200 50 20 12.5 6
  2.6 40 210 50 20 12 7
  2.6 70 370 90 35 20 12
  2.6 100 530 130 50 30 17
  2.6 60 1000 250 110 70 35
  为使粒子匀称同等需举办浮选,即插手凝胶粒子后,轻轻搅拌,静置20min,倾去沉淀的粒子,云云重复数次即可。

  三、装柱
  层析柱的选择一样平常按照疏散样品的种类和样品的数目而定。纯化卵白质时,食品检测,柱床体积应为样品体积的25~100倍。去盐、游离荧光素约为样品体积的4~10 倍。柱太短,影响疏散结果。柱长一些,疏散结果好,但柱太长,则延迟疏散时刻,样品也稀释太过。层析柱的内径也要选择恰当。内径详尽,会产生“器壁效应”,即接近管壁的流速要大于中心的流速影响疏散结果。以是层析柱的内径和高度应有必然的比例。对付除盐来说应为1:5~1:25;对付纯化卵白质来说应为1:20~1:100。
  四、加样与洗脱
  样品体积不宜过多,最好为床体积的1%~5%,最多不要高出10%。样品浓度也不宜过大,浓渡过大粘度大,疏散结果差,一样平常不高出4%。
  洗脱液应与膨胀同等,不然改换溶剂,凝胶体积会产生变革,影响疏散结果。洗脱液要有必然的离子强度和pH值。疏散血清卵白常用 0.02~0.1Mol/L pH 6.9~8.0的PBS液(0.14Mol/L NaCl)和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl缓冲盐溶液(0.14Mol/L NaCl)。
  五、洗脱液网络
  操作自动分步网络器网络,并以20%磺基水杨酸测试,当卵白液下来时,开始分担网络,至无卵白液为止。

    六、凝胶柱的一再行使与生涯
  当样品的各组分所有洗脱下来之后,即可插手新的样品,继承行使。生涯要领有三种:
  (1) 在液相中生涯最利便,即于凝胶悬液中插手防腐剂(如0.002%洗必泰)或高压灭菌后4℃生涯。此法至少可以生涯半年以上。
  (2) 用完后,以水冲洗,然后用60%~70%酒精液冲洗,凝胶体积缩小,即在半紧缩状态下生涯。
  (3) 恒久不消者,最好以干燥状态生涯,即水洗净后,用含乙醇的水洗,逐渐加大乙醇用量,最后用95%的乙醇洗,可所有去水,再用乙烯去除乙醇,生产技术,抽滤干,于 60℃~80℃干燥后生涯。加乙醇时,切忌一上来就用浓乙醇处理赏罚,以防结块。


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